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人表皮生長因子受體(EGFR)ELISA試劑盒實驗使用說明書
BS-1691人表皮生長因子受體(EGFR)ELISA試劑盒
以下是關于人表皮生長因子受體(EGFR)ELISA試劑盒的實驗使用說明，綜合了多個可靠來源的操作指南和技術要點?：
一、實驗原理
采用雙抗體夾心法：將純化的EGFR捕獲抗體包被于微孔板形成固相抗體，依次加入樣本、標準品和HRP標記的檢測抗體，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物。經洗滌后加入TMB底物顯色，顏色深度與EGFR濃度呈正相關，最終在450nm波長下測定OD值?。
二、試劑盒組成
預包被酶標板?：96孔或48孔配置?
標準品?：凍干粉需用稀釋液復溶(典型濃度800pg/ml或4,000fmol/L)?
檢測抗體?：生物素標記的抗EGFR抗體?
顯色系統(tǒng)?：TMB底物A/B、終止液?
洗滌緩沖液?：需按說明書稀釋?
三、樣本處理
樣本類型 處理方法
血清/血漿 2-8℃離心20分鐘(1000g)，避免反復凍融?
組織勻漿 按1:9重量比加入PBS勻漿，5000g離心5-10分鐘?
細胞培養(yǎng)上清 直接離心(1000g，20分鐘)或-20℃保存?
四、操作步驟
加樣?
空白孔加稀釋液，標準品孔梯度稀釋(建議雙孔檢測)，樣本孔加50μl?
37℃孵育40分鐘?
洗滌?
使用1×洗滌液，每孔350μl，浸泡1-2分鐘后拍干，重復4-6次?
加檢測抗體?
每孔加100μl生物素化抗體工作液，37℃孵育30分鐘?
顯色與終止?
加入TMB底物避光反應15-20分鐘，顯藍色后加終止液變黃色?
五、關鍵參數(shù)
檢測范圍?：3.9-250pg/mL(EGF)或156-10,000pg/mL(EGFR)?
靈敏度?：≤1.6pg/mL?
重復性?：板內/板間變異系數(shù)<10%?
六、注意事項
所有液體組分使用前需充分混勻，避免泡沫?
不同濃度樣本需更換槍頭防止交叉污染?
顯色時間需根據(jù)實際調整，底物變藍即失效?
實驗廢棄物應按生物危害物處理?
注：以上資料僅供參考，如需具體品牌的操作視頻或標準曲線建立方法，可參考以下補充說明?。
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